Действие «Vampire Knight» происходит в Академии Кросс, престижном частном учебном заведении с не совсем обычными классами. В Академии Кросс два отделения: Дневное и Ночное. На Дневном учатся обычные люди, а ученики Ночного считаются элитой. Студенты Дневного класса и их преподаватели не знают, что по-настоящему все ученики Ночного - вампиры. Главная героиня, Юки Кросс, воспитанница директора Академии. Вместе с Зэро Кирю - другим воспитанником директора Кросса и наследником клана охотников на вампиров - она, как староста, должна следить за порядком в Академии, по возможности пресекая все контакты между Ночным и Дневным классами, сохраняя при этом тайну вампиров.

Вампиры в Vampire Knight разделены на категории. Они могут иметь интимные связи между собой, а так же с людьми. Так же известно, что вампиры стареют, но гораздо медленней людей. Вампиры являются ночными созданиями, поэтому не любят дневной свет, но вреда он им не причиняет. Так же им не вредят традиционные виды оружия против вампиров: кресты, чеснок, святая вода и прочее. Вампиры скрестились с людьми для увеличения численности собственного вида. Тем самым они создали общество, в котором уровни распределяются в зависимоти от чистоты крови:

Уровень A — чистокровные. Меньшинство, но его представители являются сильнейшими вампирами. Только укус чистокровного может обратить человека в вампира.
Уровень B — Благородные (или Аристократы). Обладают большой силой, но куда слабее чистокровных. Почти все ученики Ночного класса Академии Кросс - аристократы.
Уровень C — обычные вампиры. Являются наибольшей группой.
Уровень D — вампиры, которые когда-то были людьми. Небольшая группа, так как обращение запрещено, а так же это могут делать только вампиры уровня A.
Уровень E — низший уровень. Эта группа отделена от других, потому что в ней состоят вампиры, которые прежде были людьми, но теперь потеряли рассудок. Считается, что все обращенные вампиры рано или поздно упадут до этого уровня, потому что никогда не смогут жить с инстинктами вампира.
Вампиры, сошедшие с ума и начавшие бесцельные убийства (не только категории Е), попадают в списки охотников на вампиров